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    血清使用常见问题和解决办法(1)

    血清使用常见问题

    1、血清保存的最好方法?
    建议血清最好保存在-15以下。若一次使用不完一瓶,建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。

    2、如何解冻血清,才能保证其质量不会受损?
    我们建议将血清从冷冻箱取出后,置于 28冰箱中解冻,然后在室温下全融,解冻过程中必须规则地摇晃均匀。

    3、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀?应该怎样处理?
    血清中絮状沉淀产生的原因有很多,其中最普遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,这也是造成沉淀的主要原因,但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀,可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中,20003000rpm 离心 5min。一般不建议用过滤的方法去除絮状沉淀,因为沉淀会阻塞滤膜,造成过滤困难或无法过滤。

    4、为什么要热灭活血清?有必要热灭活吗?
    加热可以灭活血清中的补体系统,使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞,同时还能够参与溶解细胞的过程。诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活;而在免疫学研究和 ES 细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中,推荐使用热灭活血清。实验显示,经正确热灭活处理的血清,对细胞的生长只有微小的促进或完全没有促进作用,而通常因为高温处理影响了血清的质量,造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清,沉淀物明显增多,倒置显微镜下观察呈小黑点,往往会使研究者误以为是血清受到了污染,而把血清放于 37中,沉淀物又会更增多,有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须,可以不进行热处理,既节省时间又确保质量。

    5、如何避免沉淀物的产生?
    我们建议您在血清使用的过程中,采用正确的解冻方法(冷冻→4室温),若血清解冻时改变的温度太大(如冷冻→37)非常容易产生沉淀物。温度过高、时间过久、摇晃不均匀等,都会造成沉淀增多,我们建议如非必要无须对血清进行灭活;若必须热灭活,应严格遵守 5630min 的原则,并随时摇晃均匀。


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